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Cytochrome oxydase et cytochrome c réductase NADH activités ont été analysées biochimiquement dans hiops gingiv.il> spécimens provenant de 22 patients de sexe masculin (23-72 ans) qui subissent un traitement parodontal. Histologiquement. 13 échantillons présentaient une inflammation légère, tandis que 9 ont montré plus sévère des réponses inflammatoires. L'activité du cytochrome oxydase a été significativement plus importante dans le légèrement enflammée que dans des échantillons de tissus très enflammé. NADH activité du cytochrome c réductase, d'autre part n'a pas été significativement modifié par le degré croissant de l'inflammation. L'implication éventuelle de l'effet de l'inflammation sur les enzymes d'oxydation est discuté en relation avec des modifications dégénératives et prolifératives survenant dans les deux types de tissus. Introduction Cytochrome oxydase (E.C1.9.3.1.) NADH et le cytochrome c-réductase (ECI, 6. 2. I.) ont été déterminés dans essentiellement humains normaux gencive (Eichel & Sharhrik 1964), toutefois, ces paramètres n'ont pas déjà été analysés dans rapport aux effets imposées par l'inflammation gingivale. Études de respiration endogène a révélé que le QOj est stimulée dans l'inflammation gingivale légère, et déprimé en très enflammée gencive (Glickman et al. 1949, Manhold & Volpe 196,1). D'autre part des études récentes Polarographie (Zajieck & Kindlova 1972) a révélé que les premières QO_. valeurs est restée constante dans la gencive de l'homme et n'ont pas été significativement modifiée par le degré d'inflammation. Compte tenu de ces divergences de vues, nous souhaitons rendre compte de l'effet de l'inflammation sur la cytochrome oxydase et le cytochrome c réductase NADH activités dans des homogénats total de gencive humaine. Methods and Materials Préparation des tissus Biopsies gingivales de l'homme ont été obtenus Irom 22 patients de sexe masculin (23-72 ans), qui suivent un traitement parodontal. Anesthésie par bloc régional a été administré pour éviter l'infiltration des tissus. Le tissu a été enlevée chirurgicalement et les couper en deux parties dont l'une a été préparé pour l'étude histologique. L'autre a été lavé dans le froid 0,075 M tampon phosphate pH 7,0. pour enlever le sang et adhèrent rapidement congelé à - 70 ° C sur la glace sèche. Le Bureau des obligations familiales / fr échantillons gingivales ont été analysés pour leur activité enzymatique dans la journée après leur élimination. Homogénats gingival ont été préparés par une modification des méthodes (Hoober & Bernstein 1966) utilise Tor l'homogénéisation de la peau de rat. Le tissu gingival congelées (25-5U mg poids humide.) A été plongé dans un liquide N, (-270 'C) pendant 3 minutes, et pulvérisés pour petits fragments granuleux. Les fragments gingival ont été homogénéisés dans un tampon froid dans Ten Broeck homogénéisateurs sol de verre qui ont été broyés à la forme avec une clairance de la tolérance o ((1.1-0.15 mm. Les activités enzymatiques ont été déterminées immédiatement après homogénéisation des tissus. Enzyme analysis Cytochrome oxydase (EC 1. 9. 3. 1.) (Wainio et al. 1951) a été mesurée par spectrophotométrie suivant hy l'oxydation de dithionite de cytochrome c réduit à I * C al ° 25 dans un Gilford Modèle 2400 spectrophotomètre. Dans les expériences d'auto-zéro la vitesse d'oxydation de C lerrocytoehrome avant l'addition de l'enzyme a été négligeable. Le VHI E. "", les valeurs d'absorbance pour régler homogénat étaient pour la plupart négligeables (0,0% dans 16 échantillons), et en cas de détection, ils s'échelonnent de 0, (12-13.0 '; de la valeur enzymatique. La valeur moyenne a été décantation 2,5 ± 0,9 CI pour les 22 échantillons qui ont été analysés. S'installer valeurs ont été déterminées par une nouvelle réduction de la réaction des médias avec le dithionite excès, en suspendant l'homogénat en milieu de réaction, et suite à l'évolution de l'absorbance optique à contre-temps Ejaonni graphiquement. Le valeurs de décantation ont été soustraites de la valeur totale d'absorbance observées obtenues dans les dosages enzymatiques touchés, et les activités spécifiques ont été déterminés à partir des valeurs corrigées. Le mélange réactionnel contenu: 75 mM KH .. PO |-Na,. HPO4 tampon pH 6,75. 5.6 cytochrome c UM et (25-150) protein Jig (homogenale) dans un volume final de 300 u. concentration en cytochrome c est déterminée à partir de l'extinction millimolaire coefficient de H cytochrome c-,,-,;, t] out = 18,5 mm » cm »pour C. La cvtoehrome réduit moins oxydé NADH cytochrome c réductase. NADH cytochrome c-réductase (EC 1. 6. 2. 1.) (Jeng et al. 1968) a été déterminée par suite de la réduction du cytochrome c à Er,, à 25 ° C. TNM. L'extinction millimolaire coefficient utilisé pour le cytochrome c dans le test de la cytochrome oxydase a été utilisée pour ce test. Le système de dosage figurant: 33 mm KHiPOi-NaoHPO., PH 7,75 tampon, S.2 FtM cytochrome c, 3.0mm KCN, 85 / LIM .** et NADH (25-150) ^ g de protéines (homogénat) dans le volume final de 300 II. Activités particulières Des activités spécifiques sont exprimées en nanomoies du cytochrome c oxydé (cytochrome oxydase) ou réduit (NADH cytochrome c-réductase) par mg de protéines par min. Dosage de la protéine Homogénats de tissus (10-20 / A) ont macéré dans de NaOH 0,05 N (concentration finale) pendant une heure à 25 ° C, et analysés pour des protéines par la méthode de Lowry et al .. (1951). Albumine Crystalline *** a été utilisé comme une norme. Statistiques L'écart type moyen, et l'erreur standard ont été déterminées pour chaque groupe. Des valeurs dépassant les limites de ± 1,96 SD ont été rejetées. La différence entre chaque groupe a été analysé par le T "étudiant" test et toutes les valeurs p <.05 ou moins ont été considérés comme significatifs. Réactifs NADH ** (Grade 111!, Et E * cytochrome (type I 11 Horse Heart I, ont été obtenus chez Sigma Chemical Corp, St. Louis, Mo. Crystalline albumine *** a été obtenue à partir Pentex Corp Kankakee, 111. L'évaluation histologique Les biopsies ont été coupées à 7 / i et colorée à l'hématoxyline-éosine. Chaque section a été diagnostiqué comme légère, modérée ou 224 FINE. Egnor, FOMTECCHIO, Froum, SCOPP et Stahl d'une inflammation sévère en fonction (il étendue de l'infiltrat inflammatoire dans les sections represenlativc des spécimens. Résultats Histologiques AMI Évaluations cliniques Évaluation histologique des biopsies a révélé que 13 échantillons gingivaux relevaient de la catégorie légèrement enflammée, à mi 9 échantillons ont été désignés comme d'une inflammation sévère. Les activités spécifiques de la cytochrome oxydase et cytochrome c réductase NADH activités ont été corrélées avec le degré observé de l'inflammation gingivale et les données ont été analysées statistiquement. Oxydase ytochrome C ' (Cytochrome oxydase activité spécifique) a été trouvée à diminuer, passant de 5,4 ± 0,7 en légèrement enflammée à 3,0 ± 0,3 dans la gencive d'une inflammation sévère (tableau I). L'activité spécifique d'(il a légèrement enflammée a été significativement supérieure (p <.001) que celui des échantillons d'une inflammation sévère gingivale. NADH cytochrome c réductase Cytochrome c réductase NADH activité n'a pas été altérée de façon significative selon le degré d'inflammation gingivale. Les activités spécifiques étaient de 16,5 ± 1,6 et 15,3 ± 2,1, respectivement, en douceur et d'une inflammation sévère gencive Discussion Bien que la cohérence des gencives enflammées mai varier considérablement d'une région à l'autre, et ainsi effet le degré de fragmentation, cela ne semble pas être le cas dans nos préparatifs. L'exposition de nos tissus gingivaux au liquide N.>. la pulvérisation de l'émission (, le dégel et l'homogénéisation ultérieures apparaît à perturber de manière adéquate les cellules. Preuve de cette interprétation réside dans l'observation que la distribution de NADH cytochrome c-réductase dans les deux légèrement enflammée et très enflammé gencive n'a pas varié de manière significative. Si la baisse des cytochrome oxydase a été influencé par nos techniques de préparation des tissus, des résultats similaires devraient être observés dans les distributions du cytochrome c réductase NADH. Le montant de s'installer dans notre système de dosage a été jugée négligeable pour la plupart, et il ne pouvait pas expliquer la baisse marquée des activité de la cytochrome oxydase observé dans la gencive très enflammé. L'activité élevée cylochiomc oxydase observé dans notre étude coïncide avec les observations faites par Manhold et Volpj (1963) dans leurs études de respiration endogène QCK légèrement enflammée et qui prolifèrent gencive de l'homme. L'augmentation de la qualité de vie> et la cytochrome oxydase dans la gencive mai reflètent une augmentation mitochondrial obligataires de haute énergie (ATP) de synthèse, qui est nécessaire pour soutenir le processus hautement synthelic associés à la synthèse de l'ADN, mitose, ainsi que la prolifération cellulaire. Une preuve supplémentaire de l'augmentation des besoins bioencrgelic dans le pré-prolifération et les étapes du développement des cellules prolifératives est l'observation que la qualité de vie accrue. (respiration endogène) (Glickman et al. 1949) et la cytochrome oxydase (beaux-197 (1) atteint des pics d'activité à un moment où d'importantes augmentations de l'indice mitolic et la prolifération (epitheiialization) se produisent dans la gencive régénérer la peau et des plaies. Sur la IHE autre main forte baisse de la cytochrome oxydase et endogènes Qoo observée dans très enflammé (Manhold & Volpe 1963, Giickman et al. 1949) gtngiva semblent être des réflexions des changements qui interviennent dans les mitochondries ainsi que d'autres composants subcellulaires lors de la destruction importante du tissu gingival. Nous n'avons pas pu DELECT une augmentation de la cytochrome oxydase dans très enflammé et la gencive prolifèrent. Bien que l'augmentation du QO endogène. a été détectée par Giickman et al. (1949) dans ce type de pathologie gingivale. Toutefois, il est concevable comme lhal inflammation disparaît , une phase préproliférante (phase S de mitose) se produit dans les cellules migrent à la fine blessure qui nécessite une grande synthèse d'ATP. Par la suite une augmentation de la qualité de vie endogène. est également observée. Nos données cytochrome oxydase, et des données déclarées à la respiration endogène QOj ne ne pas coïncider avec la QO polarographique. observations faites par Zajieek et Kindlova (1972), qui a signalé le thai QO_ initiale> valeurs est restée constante dans la gencive de l'homme, et n'ont pas été significativement modifiée par le degré d'inflammation. NADH activité du cytochrome c réductase n'était pas significativement modifié par le degré d'inflammation de la gencive de l'homme. Nos données pour la gencive de l'homme en parallèle l'observation faite par Eichel et Shahrik (1964), pour les non-humains gencives enflammées. Cylochrome NADH activité c réductase s'est révélé être nettement supérieur oxydase cytohrome dans nos études, qui est en corrélation avec l'observation faite par Eiehcl et Shahrik <19M). D'autre part l'activité cytochrome oxydase (homogénat total) a été trouvé à être beaucoup plus grande que NADH cytochrome c-réductase dans la gencive rat normal (Fine 1970, Fine et a!. 1973a) en utilisant des méthodes de dosage identique. Ceci suggère que NADH cytochrome c-réductase n'est pas principalement associée à la mitochondrie gingivale. Des études récentes menées à l'appui (Fine et al. 1973a, 1973b) ont montré que l'enzyme est principalement distribué dans les fractions solubles et microsomal subcellulaire dans les rongeurs et la gencive de l'homme. La variation de l'activité cytochrome oxydase avec inflammation augmentant fournit des informations concernant les caractéristiques de la respiration administration dans la gencive de l'homme en relation avec l'état pathologique. L'effet de l'inflammation sur la distribution NADH cytochrome e réductase et des activités spécifiques au niveau subcellulaire sont actuellement sous enquête. AS FlNfc, R. Egnor, K. FONTLCCHIO, S. froum, 1 - W. SCOPP ET SS Stahl. Department of Dental Research, Veterans Administration Hospital de New York, NY et Département de parodontologie, Brookdale Déni Center de New York University, New York. NY. Etats-Unis |